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對PCR擴增試劑盒的一般建議及事項說(shuō)明

更新時(shí)間:2021-05-06點(diǎn)擊次數:809
   PCR擴增試劑盒在質(zhì)量控制上,每批長(cháng)片段PCR擴增試劑都進(jìn)行功能測試,常規條件下可以用特異性引物從λDNA上擴增出30 kb的片段。
  一般建議:
  PCR擴增試劑盒可很穩定的擴增出終長(cháng)度小于12 kb的片段(如基因組DNA);當擴增片段終長(cháng)度在12-20 kb時(shí)(如基因組DNA),那么模板質(zhì)量,變性條件和恰當的dNTP/Mg離子濃度等相關(guān)條件對于實(shí)驗結果非常關(guān)鍵;如果擴增片段總長(cháng)度大于20kb,則操作條件需要進(jìn)一步優(yōu)化。
  PCR擴增試劑盒相關(guān)注意事項說(shuō)明:
  1.對于長(cháng)片段擴增,請使用薄壁PCR管。
  2.變性時(shí),盡可能縮短變性時(shí)間,降低變性溫度。
  3.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
  4.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
  5.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
  6.PCR試劑配制應使用高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
  7.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
  8.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
  9.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。

TEL:021-61210612

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