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PCR擴增試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

PCR擴增實(shí)驗試劑盒純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好

更新時(shí)間:2023-09-14
訪(fǎng)問(wèn)次數:1395

PCR擴增實(shí)驗試劑盒組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

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 產(chǎn)品名稱(chēng)

 PCR擴增試劑盒

 規格

 50T

 貨號

 LZP7915

實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
鏈霉親和素Phospho-c-Cbl (Tyr774) Antibody(2R,4S)-羥基吡咯烷-2-羧酸

西他沙星Phospho-RSK2 (Ser227) (D53A11) Rabbit mAb甲酸甲酯

DHBS;3,5-二-2-羥基磺酸鈉TGM2 (D11A6) XP® Rabbit mAb-甲

NBD-PZ;硝基-7-哌并氧雜噁二唑TGM2 (D11A6) XP® Rabbit mAbL-酪氨酸甲酯鹽酸鹽

BGP;β-甘油酸鈉水合物(高純)LDHA/LDHC (C28H7) Rabbit mAb6-甲基吲哚

Fura 2-AM;鈣熒光探針Progesrone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)三水六氟酮

NBD-F;氟-7-硝基-2,1,并氧雜惡二唑CCT2 Antibody溴噻唑

魯米諾,發(fā)光氨Acetyl-α-Tubulin (Lys40) (D20G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氨基-甲基-5-溴吡啶

Leu-pNA;L-亮氨酸-CRMP-2 (D8L6V) Rabbit mAb2-噻吩

BAEE;N-甲?;?L-精氨酸酯鹽酸鹽SOAT1 Antibody甲基嘧啶

TAME.HCl;NA-P-甲磺基-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽CD34 (ICO115) Mouse mAb溴五氟

AE;N-酰-L-酪氨酸酯CD44 (156-3C11) Mouse mAb2-氟二酸二甲酯

DAPI;4,’6-二脒基-2-基吲哚CD44 (156-3C11) Mouse mAb2-氨基-5-硝基-2'-氟二甲酮

-α-D-吡喃半糖苷CD109 Antibody2-氨基-6-(三氟甲基)吡啶

ABTS;2,2'-聯(lián)氨-雙(基并噻唑啉-6-磺酸)二鹽Phospho-CD19 (Tyr531) Antibody5--2-氟

β-D-葡糖糖-6-酸鈉鹽Phospho-CD19 (Tyr531) Antibody6-甲氧基-2-萘甲

HEPBS;N-(2-羥基)哌-N'-(丁磺酸)PTMScan® Peptide Purification Kit鄰氟芐

赫斯特熒光燃料33258CD19 Antibody鹽酸洛哌丁

高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒phospho-SHC (Tyr349)  酸化SH2結構域轉化蛋白1100 ul

高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒phospho-SHC (Tyr427)  酸化SH2結構域轉化蛋白120 ul

高半胱氨酸(Hcy)ELISA試劑盒phospho-SHC (Tyr317)  酸化SH2結構域轉化蛋白1100 ul

肝脂酶(HL)ELISA試劑盒phospho-SHC (Tyr239/240)  酸化SH2結構域轉化蛋白1100 ul

肝臟型脂肪酸結合蛋白(L-FABP)ELISA試劑盒Shiga-like toxin IIe variant subunit A  大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型)100 ul

肝細胞生長(cháng)因子受體(c-MET/HGFR)ELISA試劑盒Shh/Sonic hedgehog  Shh信號轉導通路膜蛋白受體20 ul

肝細胞生長(cháng)因子激活物(HGFA)ELISA試劑盒OMPC  大腸桿菌外膜孔道蛋白C1 Kit

肝細胞生長(cháng)因子(HGF)ELISA試劑盒SHIP1  SH2結構含酸肌醇SHIP1100 ul

肝素結合EGF樣生長(cháng)因子(HBEGF)ELISA試劑盒Phospho-SHIP1 (Tyr1020)  酸化SH2結構含酸肌醇SHIP1100 ul
PCR擴增實(shí)驗試劑盒磷酸化促凋亡調節蛋白BNIP3抗體Isoerysenegalensein E中文名:別名:分子式:C25H26O6

B淋巴細胞特異性激活OCT結合蛋白1抗體8-Prenylnaringenin中文名:8-異戊烯基柚皮素別名:分子式:C20H20O5

核糖體合成蛋白BOP1抗體Auriculasin中文名:別名:分子式:C25H24O6

調節中心體分離早期相關(guān)激酶BORA抗體8-Demethylsideroxylin中文名:別名:分子式:C17H14O5

萊姆病螺旋體抗體Syzalterin中文名:別名:6,8-Dimethylapigenin分子式:C17H14O5

 

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